本发明公开了一种用于检测肿瘤突变的双标签接头序列，其特征在于，所述接头序列由接头引物P5和接头引物P7合成，其中接头引物P5为SEQ ID NO：1所示序列，接头引物P7为SEQ ID NO：2所示序列。本发明还提供了建库方法和测序方法。利用本发明的双标签接头，可以准确检测1×10‑5肿瘤突变率，有效提高肿瘤突变检测的灵敏度，结合高通量测序的通量，一次测序可以检测多个基因的多个突变位点。