本发明公开了一种少棘巨蜈蚣的环介导等温扩增检测引物组、试剂盒及检测方法。本发明针对少棘巨蜈蚣的COI基因，设计和筛选了一套特异性检测引物以及含有该检测引物的检测试剂盒和利用该检测试剂盒和利用该检测试剂盒通过环介导等温扩增进而确定待测样品是否为少棘巨蜈蚣的鉴定方法。本发明操作简单快速，仅需一台水浴锅即可完成扩增反应，检测结果可直接肉眼观察，不需要昂贵的检测仪器，同时灵敏度高，可用于市场快速检测蜈蚣药材真伪。