本发明公开了一种海南暗罗根提取物的制备方法，是取海南暗罗根的干燥粉末用碱水润湿后，加入溶剂提取；提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，加水混悬，用氯仿萃取，减压回收得到氯仿萃取部位，即为海南暗罗根亲脂性总生物碱部位，该部位包括四个咔唑类、三个阿朴菲类和一个酰胺类生物碱。本发明制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有很好的广谱抗肿瘤活性，可以应用于预防和治疗肿瘤药物中。