本发明公开了一种毛叶鹰爪花总生物碱提取物，是取毛叶鹰爪花枝叶的干燥粉末用酸水冷浸提取后，合并酸水提取液，经过滤后用碱水进行碱化，加入乙酸乙酯进行萃取，减压回收乙酸乙酯得到乙酸乙酯萃取部位，即为毛叶鹰爪花枝叶的总生物碱部位，该部位主要包括4个为阿朴菲类生物碱、2个为苄基异喹啉类生物碱、2个为原阿朴菲类生物碱、2个吗啡烷类生物碱和2个原小檗碱类生物碱等12个生物碱。本发明制得的总生物碱提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有良好的抗肿瘤活性，可以单独或者与其他抗肿瘤药物配伍用于治疗各类肿瘤性疾病。