本发明公开了一种基于四氧化三钴和辣根过氧化物酶修饰电极的电化学生物传感器件的制备与应用研究。采用碳离子液体碳糊电极(CILE)为载体，将纳米四氧化三钴(Co3O4)混悬液滴涂在CILE表面，再将辣根过氧化物酶(HRP)用Nafion膜固定在电极表面，得到修饰电极Nafion/HRP/Co3O4/CILE。紫外可见吸收光谱表明HRP在Co3O4复合膜内保持原有的蛋白质二级结构。利用循环伏安法测定修饰电极在pH=3 PBS缓冲溶液的电化学行为，出现一对峰型良好的氧化还原峰，表明Co3O4对HRP的直接电子转移有良好的促进作用，非均相电子转移速率常数为0.94 s‑1。同时探究了修饰电极对三氯乙酸的电催化行为，线性关系良好，灵敏度高，检测限较低，表观米氏常数为88.15 mmol/L，检测限为1.7 mmol/L，表明Co3O4可应用于第三代电化学传感器的制备。