本发明公开了一种马兜铃内酰胺类化合物及其制备方法和应用，本发明从喙果皂帽花根部分离得到了三种新马兜铃内酰胺类化合物，分别为连有4个甲氧基和1个羟基的马兜铃内酰胺(羟基在7位，将其称作A化合物)、3个甲氧基和1个羟基的马兜铃内酰胺(将其称作B化合物)、4个甲氧基和1个羟基的马兜铃内酰胺(羟基在4位，将其称作C化合物)，A化合物和C化合物是同分异构体。其中B化合物和C化合物对蜡状芽孢杆菌有明显的抗菌活性。