本发明公开以大孔树脂为载体的甘露聚糖酶固定化方法及其应用，其特征在于甘露聚糖酶固定化方法包括以下步骤：(1)将大孔树脂在乙醇中浸泡6-12小时，滤去乙醇后，洗至洗脱液蒸干后无残留物，经乙醇洗净的大孔树脂干燥后保存备用；(2)将干燥后的大孔树脂放入含有甘露聚糖酶的乙酸-乙酸钠缓冲液中，缓冲液pH值为4.0-6.0，保持温度为45-60℃震荡吸附6-12小时；(3)用质量浓度为0.5-4％的戊二醛，震荡交联2-6小时，真空抽滤得到固定化甘露聚糖酶，置于4℃冰箱中储存。本发明的有益效果为：工艺简单、成本低廉、性质稳定、可重复使用；本发明的固化酶对含甘露聚糖类多糖的芦荟多糖的降解效果更为显著。