本发明公开了一种测定三尖杉科植物中三尖杉生物碱总碱含量的方法，包括以下步骤：(1)选取三尖杉碱标准品，加入变色酸溶液、浓磷酸和过氧化氢，摇匀后微波加热，得标准品反应液；(2)将标准品反应液冷却至室温，定容，并比色，将比色得到的吸光值与步骤(1)中的三尖杉碱标准溶液的浓度相关联，建立三尖杉碱吸光度值-浓度的标准曲线；(3)选取三尖杉科植物样品或三尖杉科植物的悬浮培养细胞，提取其中的三尖杉生物碱总碱，(4)参照步骤(2)、(3)，测其吸光值，将测得的吸光值代入上述吸光度值-浓度的标准曲线，获得三尖杉科植物样品的浓度，经换算即获得三尖杉科植物样品中三尖杉生物碱总碱含量。该方法简便、安全、快捷、准确。