本发明涉及电化学技术领域，特别涉及一种工作电极及其制备方法、生物传感器。该工作电极的原料为活性炭，经成型、氧化、修饰纳米金属、硅烷化、接枝戊二醛、固载生物酶获得；工作电极的直径为0.5～10mm，长度为1～10cm，碘吸附值为700～2500mg/g，比表面积为700～3500m2/g，灰分≤4％。本发明提供的工作电极对生物酶的固载量得到了显著的提高，生物酶固载量可达52.5mg/g，而且该工作电极的灵敏度高、抗干扰能力强。本发明提供的生物传感器中的工作电极可拆卸，更换简单，生物传感器易于操作，可连续测量；而且待测液独立存在，进出样简便；磁力搅拌转子的设置可进一步提高检测灵敏度。