本发明公开了一种检测基因Ⅳ型戊型肝炎病毒抗体的间接ELISA方法，步骤包括：1)构建重组表达质粒pET42a?ORF3，将pMD18T?ORF3质粒和pET42a(+)原核表达载体转化DH5a感受态细胞，涂布于LB固体培养基上过夜；挑取单菌落接种于LB培养液中过夜；36小时后离心，收集菌体，提取质粒DNA；在连接酶的作用下，将双酶切后的ORF3片段与pET42a(+)原核表达载体进行连接，获得重组表达质粒pET42a?ORF3；2)对重组表达质粒pET42a?ORF3诱导表达和纯化；3)得到成功表达了His/GST?ORF3融合蛋白，即可用于血清学调查。本发明的方法，成本低，准确率高。