本发明公开了一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法，包括以下步骤：(1)选取植物幼嫩组织，破碎后，加入酶解液混匀，酶解其细胞壁；(2)将产物洗涤、纯化后获得原生质体悬浮液，并在原生质体悬浮液中加入水解酶以保持细胞壁纤维素的低水平再生；(3)将加入水解酶的原生质体在亚低温或亚高温条件下温浴，温浴结束后，加超纯水以降低溶液渗透势，定时测定原生质体的直径；(4)用获得的原生质体的直径值，计算多个原生质体单位时间、单位渗透势、单位面积细胞膜上水分从细胞外进入细胞内的净速度Lp的平均值，该Lp平均值和所选植物适宜温度下的Lp值差值越大，说明其亚低温或亚高温耐受性越差。该方法具有适用性广、分辨率高的特点。