本发明公开了一种苹果坏死花叶病毒侵染性全长cDNA克隆及其构建方法。本发明提供的构建苹果坏死花叶病毒侵染性全长cDNA克隆的方法包括如下步骤：将苹果坏死花叶病毒的三分体基因组中的RNA1、RNA2和RNA3对应的cDNA序列(序列1‑3，或者序列4‑6)分别克隆到植物双元表达载体中，得到三个重组表达载体；所述三个重组表达载体即构成苹果坏死花叶病毒侵染性cDNA克隆。本发明构建的ApNMV的侵染性cDNA克隆能够成功侵染本生烟。利用该方法，能够较为快速、高效地构建出ApNMV的侵染性克隆，有利于后续开展ApNMV的生物学特性和致病机理研究。