本发明涉及一类潜在的绿色有效防治南方根结线虫的马兜铃酸及其衍生物类化合物的分离筛选方法，主要包括以下步骤：将马兜铃属植物枝干剪成小段、烘干、粉碎、甲醇提取、最后经石油醚、氯仿萃取，浓缩，取石油醚和氯仿浸膏分别进行洗脱，采用反复柱层析、沉淀和重结晶的方法进行分离纯化，针对分离获得的化合物进行活性筛选，得到3种具有杀线虫活性的化合物。采用本发明方法工艺流程较为简单，获得的三种杀线虫活性化合物作为植物次生代谢产物，是一类潜在的绿色的杀线虫(尤其南方根结线虫)的化合物，通过活性评估对比，可以将其作为先导化合物，为进一步的结构修饰研究奠定基础。