本发明公开了一种利用活立木茎干测定担子菌中病原木腐菌致病性的方法，包括步骤：(1)制作含有木屑82％、麦麸15％、葡萄糖2％和石膏1％的木屑培养基；(2)在木屑培养基上引入菌株，制作接种菌棒；(3)选择幼树，消毒后在近地面10‑30cm处的茎干上削出一个长1‑5cm、深1‑5mm的切口为接种部位，与接种菌棒的一侧剪口匹配，接种部位下端附上湿棉花保湿，用塑料条包裹固定，再在距离接种部位上方约5‑10cm处围绕茎干将厚纸包裹呈伞形以遮盖住接种菌棒；(4)接种侵染1‑2个月，解开包裹接种体的厚纸及塑料条，进行致病性验证。采用本发明提供的方法，首次在活立木幼树茎干上进行接种，实现引起树木茎腐病和根腐病的病原木腐菌的致病性测定，成功率高且操作简易。