本发明涉及一种益生菌传递的哈维氏弧菌口服DNA疫苗的制备及应用，属于生物技术领域，所述方法包括如下步骤：1)tssJ基因片段的克隆与纯化；2)tssJ基因真核表达载体(pCTssJ)的构建；3)乳酸乳球菌F3传递重组DNA疫苗pCTssJ/F3构建。本发明还提供一种将上述疫苗制备成口服疫苗的方法，该口服疫苗接种方便，能刺激鱼体产生免疫，并对哈维氏弧菌产生很高的保护效应，且对环境无任何危害。