本发明公开了红螯螯虾孵化酶astacin基因及其ORF，还公开了一种包含红螯螯虾孵化酶astacin基因全长序列的工程菌的构建方法，包括克隆红螯螯虾孵化酶astacin基因部分片段，以携带有astacin基因部分片段的PMD19‑T质粒为模板，利用RACE技术分别扩增5’RACE序列和3’RACE序列，最终获得astacin基因全长序列。本发明通过末端快速扩增技术(RACE)首次克隆获得红螯螯虾孵化酶基因astacin的全长基因序列，长度744bp，并成功表达astacin蛋白，包含169个氨基酸，最终通过稀释复性法获得的红螯螯虾孵化酶蛋白astacin，具有明胶裂解活性。红螯螯虾孵化酶能够提高红螯螯虾孵化率，且能用于红螯螯虾的大规模养殖。