本发明属于生物工程技术领域，涉及工业微生物的育种，尤其是一株高冷冻耐性面包酵母及其构建方法。所述冷冻耐性酵母菌株通过在亲本酵母菌株中，选用强启动子PGK1过表达Snf1蛋白激酶α亚基的编码基因SNF1全序列来获得的。该菌株在冷冻环境下的细胞存活率及冷冻面团的发酵力较亲本菌株有均有显著提升，解决了面包制作过程中的技术障碍和质量缺陷，有广泛的应用前景。