本发明公开了一种PVMV侵染性全长cDNA克隆的构建方法。本发明方法包括如下：利用密码子的简并性，将甜椒脉斑驳病毒的基因组RNA对应的全长cDNA序列的第2363位的A替换为C，得SEQ ID No.1；根据SEQ ID No.1中存在的两个单一限制性内切酶AatII和BamH I的识别位点，将SEQ ID No.1分成三段；制备得到三个片段并将其克隆到同一个植物表达载体中，得到含有SEQ ID No.1的重组表达载体即为甜椒脉斑驳病毒侵染性全长cDNA克隆。利用该方法能以低成本，快速高效地构建出PVMV侵染性克隆，本发明为日后防治相关病害提供理论依据。