本发明公开了一种柔毛辣椒外植体诱导再生苗的方法，包括先获取无菌苗，后切取带柄子叶作为外植体，接种到诱导培养基上诱导获得不定芽、再依次切分转移至伸长培养基和生根培养基，其中MS诱导培养基为MS+6‑BA 5.0mg/L+IAA 0.5mg/L+AgNO33.0mg/L；伸长培养基为MS+6‑BA 2.5mg/L+IAA 0.8mg/L+GA33.0mg/L+AgNO33.0mg/L；生根培养基为1/2MS+NAA 0.2mg/L，待生根苗株高至8‑10cm，去瓶盖置于室温自然光照下炼苗移栽，采用柔毛辣椒带柄子叶作为外植体，应用开发的诱导培养基、伸长培养基和生根培养基，首次获得了具有较高诱芽率和生根率的离体再生苗，本发明方法构建的离体再生体系，为柔毛辣椒的基因功能验证以及分子育种奠定了研究基础。