本发明涉及一种羧甲基细菌纤维素的制备方法。对生物合成的细菌纤维素进行脱杂质处理，得纯净细菌纤维素；在有机溶剂和碱性水溶液混合体系中，在加热或超声波作用下，对细菌纤维素进行碱化处理，再以一氯乙酸为醚化剂对细菌纤维素进行改性，反应完成后，中和，进一步分离纯化、干燥，得羧甲基细菌纤维素。与普通植物纤维素相比，细菌纤维素具有更高聚合度和高纯度，是一种更理想的制备高粘度羧甲基纤维素的原料，所得羧甲基细菌纤维素粘度高、成本低，在食品、化妆品、医药、化工等领域具有良好应用前景。