本发明公开一种构建cDNA文库的方法，其特点是简单快速而且不需要核酸内切酶。该方法的主要步骤包括：(1)以总RNA(或者mRNA)为模板，利用这对引物通过反转录合成cDNA第一条链。(2)利用这对引物通过TaqDNA合成酶催化的PCR合成cDNA第二条链。(3)将步骤(2)得到的PCR产物通过DNA连接酶直接与T-载体连接，然后转化大肠杆菌感受态，得到cDNA文库。本发明的方法构建cDNA文库成本极低，RNA模板需要量很少，而且适用于任何来源生物样品RNA。