本发明公开了一种同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚含量的方法，包括标准品柚皮素储备液的制备、标准品圣草酚储备液的制备、柚皮素和圣草酚混合标准品溶液的制备、标准曲线的制作、待测样品溶液的制备、鲜切荸荠黄化组织样品中柚皮素和圣草酚含量的计算六个步骤。本发明方法可以对鲜切荸荠黄化组织中的柚皮素和圣草酚进行有效地分离，另外还同时测定了其柚皮素和圣草酚含量，而且此方法简便快捷、准确可靠，能排除鲜切荸荠黄化组织中所含其他物质色谱和其他物质产生的干扰。