本发明涉及医药技术领域，公开了一种酶法制备奥利司他中间体的方法，包括短链醇脱氢酶原始基因的合成、短链醇脱氢酶的表达、细胞破碎及酶催化等步骤，利用短链醇脱氢酶催化法制备高手性ee值(ee＞99%)的奥利司他中间体(R)‑3‑羟基‑十四烷酸甲酯，以替代传统的化学合成方法，减少生产成本及对环境的污染。本发明提供的奥利司他中间体的合成方法，反应条件更温和，反应速度更快，反应收率和手性ee值高，且生产成本低，适合工业扩大化生产。