本发明提供了一种修复哺乳动物肠道损伤冻干粉的制备方法，涉及生物干细胞技术领域，通过筛选培养对象并分离、脐带清洗及处理、脐带组织培养、间充质干细胞传代培养、间充质干细胞培养上清液处理以及冻干粉的制备等多重工艺手段，实现了制备出用于修复哺乳动物肠道损伤的含有高活性的脐带间充质干细胞分泌的多种细胞因子的试剂。