本发明涉及一种抗疲劳药物组合物及其制备方法和用途，所述药物组合物包含高车前苷及药学上可接受的载体，进一步的所述药物组合物包含其他抗疲劳活性成分，优选的所述其他抗疲劳活性成分选自：红景天苷、牛磺酸、人参皂苷或绞股蓝皂苷。本发明药物组合物可显著缓解身体的疲劳状态，可广泛应用于运动疲劳、亚健康导致的疲劳及慢性疲劳等的预防和治疗，安全，无任何毒副作用。