本发明公开了一种羟基自由基的比色检测法及其应用，属于检测技术领域，检测试剂中的硝基咪唑与·OH自由基反应释放亚硝酸根，亚硝酸根与Griess试剂反应生成的红色偶氮产物在540nm处具有最大吸光值；该检测方法不仅可以通过UV‑Vis，还可以通过简单的肉眼识别来检测·OH自由基的浓度；另外，本发明还提供了一种简单、直观且易于商品化的试剂盒。