本发明属于生物医药技术领域，涉及一种靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞慢病毒载体及其构建方法。该构建方法包括以下步骤：步骤1：根据Runx2基因序列，设计合成双链DNA片段；步骤2：将合成的双链DNA片段连接到GV493载体的多克隆位点中构建Runx2‑RNA重组载体；步骤3：将构建的Runx2‑RNA重组载体与shRNA慢病毒共转染到小鼠成骨样细胞培养。本发明成功构建特异性抑制成骨细胞Runx2基因的慢病毒载体，并确定了其作用的时间、相应的剂量。为译解成骨细胞在CCD疾病发生过程中分子信号转导的相关机制打开新的思路，进而为牙齿萌出异常的防护和治疗提供新的理论和实验依据。