本发明属于含有抗原或抗体的医药配制品技术领域，公开了一种包含密码子优化CFP10基因的结核DNA疫苗，密码子优化CFP10基因序列为SEQ ID NO：1；公开一种包含密码子优化CFP10基因的结核DNA疫苗；结核DNA疫苗的制备方法包括优化CFP10密码子；构建密码子优化CFP10表达质粒。本发明对CFP10的编码密码子进行人体密码子偏嗜性改造，改变编码CFP10的编码密码子，使其在人体更高效表达CFP10蛋白，且表达的CFP10蛋白的氨基酸序列不变，从而提升DNA疫苗的免疫效果。