本发明公开了一种生产L‑木糖的重组变形假单胞菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将合成的2‑酮基葡萄糖酸还原酶基因和来源于Corynebaterium ATCC 31090的2, 5‑二酮基葡萄糖酸还原酶基因和Saccharomyces cerevisiae的丙酮酸脱羧酶基因，以双质粒系统在宿主变形假单胞菌中成功表达，获得的基因工程菌株在摇瓶上发酵56h，L‑木糖的产量可达16.2g/L，转化率达到了20.3％，在3L和15L发酵罐上分别发酵48h和44h，L‑木糖的产量分别可达37.6g/L和45.8g/L，葡萄糖转化率分别为47.0％和57.3％。该方法原料成本低，对环境无污染，且操作简单，具有重要的经济效益和社会效益。