本发明公开了一种冻存液，所述冻存液包含以下含量的组分：二甲基亚砜体积百分含量为1～5％、海藻糖20～80mmol/L、过氧化氢酶5～15μg/mL、Z‑缬氨酸‑丙氨酸消旋‑ASP(甲酯)‑氟甲基酮10～40μg/mL、胰岛素0.1～3μg/mL和硒0.01～10mg/L。本发明所述冻存液中无血清，避免了病原菌的污染，二甲基亚砜(DMSO)的含量较少，减小了细胞毒性；本发明的细胞冻存液由纯化学物质组成，成分稳定，批次间稳定性好；采用本发明所述冻存液冻存的细胞复苏后细胞活力显著增强。本发明还公开了冻存液在间充质干细胞冻存中的应用。本发明还公开了一种间充质干细胞的冻存方法。