本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括以下组成部分：破乳剂、注射器、比色卡；所述试剂盒还包括快速检测试纸或96孔板；所述破乳剂为含0.33％体积分数盐酸的乙醇溶液、含0.05％体积分数三氟乙酸的乙腈溶液中的一种。采用本发明的试剂盒可快速定量定性检测油佐剂疫苗中的蛋白含量，该试剂盒制作简单，操作简便，无需进行繁琐的预处理，且检测结果准确，为口蹄疫疫苗行业提供了一种快速有效的检测手段。