本发明涉及一种测定抗Jo‑1抗体的试剂盒，所述的试剂盒包括第一试剂，所述的第一试剂包括偶联有生物素的混合物，所述的混合物包括Jo‑1抗原和tRNA。本发明的试剂盒及检测方法具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点，该检测体系能够随机上样，任意组合，连续检测，同时大大缩短了检测时间，1小时能完成120个测试，而且操作简单方便，真正实现了检测全自动化，避免了认为操作带来的结果偏差。本发明的检测结果与传统方法相比，符合性一致，且Jo‑1抗体阳性在皮肌炎/多肌炎中的的检出率提高至35％～40％，同时阳性信号值提高了10％～20％。