本发明公开了一种依替巴肽的制备方法，包括以Fmoc‑Cys(Trt)树脂为偶联树脂载体，依次偶联接入Fmoc保护的氨基酸、保护氨基酸三肽片段；将依替巴肽树脂使用裂解剂裂解；将还原型依替巴肽在乙腈水溶液中使用氧化剂氧化，氧化后浓缩；将依替巴肽粗品浓缩液纯化、转盐、冷冻干燥后得到依替巴肽精品。本发明的制备方法，可以有效的降低生产成本，提高收率，减少成品中杂质含量。