本发明公开了一种水解制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，属于生物工程技术领域。本发明以大分子透明质酸为底物，通过控制水蛭型透明质酸酶(LHase)和牛睾丸型透明质酸酶(BTH)两种透明质酸水解酶的添加量和反应时间，同时制备得到两种不同结构的奇数聚合度透明质酸寡糖(三、五、七糖)。本发明提出来一种新的、简单易行的制备奇数聚合度透明质酸寡糖的方法，为奇数聚合度透明质酸寡糖的功能及特性研究奠定了基础。