本发明属于磷脂深加工技术领域，涉及一种高纯度蛋黄磷脂酰乙醇胺的制备方法。将蛋黄粗磷脂溶于氯仿中，以硅胶为固定相，氯仿、甲醇和冰乙酸混合溶液为洗脱剂进行等度洗脱，洗脱过程用薄层色谱进行监控，收集洗脱有磷脂酰乙醇胺的组分，旋转蒸发浓缩并用氮吹仪干燥，制得纯度为90％～98％的蛋黄磷脂酰乙醇胺。本发明采用三元混合溶剂梯度洗脱，操作过程简单，工艺简单，不需要复杂的设备，成本低廉，生产效率高，适合工业化生产，其中有机溶剂可以回收使用，填料通过再生处理重复使用。本发明制得的蛋黄磷脂酰乙醇胺纯度高，可以用于功能性食品、医药、化妆品等工业领域。