本发明涉及羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒。本发明将提纯的布鲁氏菌脂多糖(LPS)经定量后包被96孔酶标板，以人工免疫健康绵羊制备阳性血清，以健康非免疫绵羊血清作阴性血清，以HRP标记兔抗羊Fc端抗体、底物溶液、终止液、样品稀释液、HRP标记兔抗羊IgG稀释液及20×洗涤液等组分组装而成，用于检测羊血清中的光滑型布鲁氏菌抗体。本发明在常规提取LPS中，增加了蛋白酶K消化和苯酚抽提步骤，有效提高了LPS纯度；筛选了对山羊和绵羊均具有良好亲和力的单克隆抗体作为酶标二抗。本发明通过对主要试剂配方的改进和优化，有效控制试剂盒的反应背景，缩短了高通量检测所需的时间。