本发明公开了一种利用HPLC测定阿格列汀原料药及制剂中对映异构体杂质的方法，选择硅胶表面涂敷有直链淀粉‑三((S)‑α‑苯乙基氨基甲酸酯)为固定相，以均含有三乙胺或二乙胺的正己烷和乙醇的混合溶剂作为流动相梯度洗脱。采用该方法可以将阿格列汀或其盐与阿格列汀的对映异构体进行分离，有效控制阿格列汀原料药及其制剂的质量。该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、耐受性好，操作方便，可有效控制药品质量。