本发明公开的是一种酶活测定方法，解决了现有技术中采用亚甲基蓝作为受氢体进行检测时，显色浅，反应时间长等问题。本发明包括第一步：将样品与混合试剂混合后放置到紫外光分析仪中，调节到酶反应的合适反应条件；第二步：在分光光度计中，检测在主波长340nm吸光度下降的速度，进而测算出酶的活性大小；所述样品为氧化还原酶，所述混合试剂包括：磷酸缓冲液、谷氨酸、2‑酮戊二酸酯、NADPH、腺苷三磷酸、亚甲基蓝，乙二醇。本发明能有效减少反应时间，使颜色变化更加显著，效果更好。