本发明公开了一种快速检测CHO细胞发酵液中重组人神经生长因子含量的方法。具体采用丁基硅烷键合硅胶反相C4柱的色谱柱；流动相：A为0.1体积%三氟乙酸水溶液，B为0.1体积%三氟乙酸乙腈溶液，0.22μm滤膜过滤，超声脱气10min后使用，变梯度洗脱，极性有机溶剂的浓度为连续性递增：0‑30min由10体积%B升到40体积%B，30‑35min由40体积%B升到90体积%B，35‑36min由90体积%B降到10体积%B，36‑41min维持10体积%B 5min；最后进行含量计算即可。该检测方法准确度高、精密度好，系统适用性、回收率、线性关系、稳定性好。