本发明涉及化学分析领域，具体而言，涉及一种测定醋酸阿托西班有关物质的方法。测定醋酸阿托西班有关物质的方法，包括以下步骤：采用球状蛋白亲水改性硅胶为色谱柱填料并对供试品溶液进行上样，而后利用溶液呈酸性的流动相A和有机溶剂为流动相B进行洗脱后进行检测。其中，洗脱时流动相A和流动相B以体积为60‑90：10‑40的比例进行洗脱。其能快速、有效地分离并检测出醋酸阿托西班原料药和注射液中的有关物质。