本发明属于基因工程领域, 尤其涉及一种转染试剂及其制备方法和应用，所述转染试剂组成为：终浓度为10～50ng/ml的阳离子聚合物、终浓度为0.1～20μg/ml的重组多肽、终浓度为5～80ng/ml的阳离子脂质体。本发明能够显著提高具有单一溶酶体逃逸效应的非病毒载体的转染效率，进而提高核酸的递送效率；此外，本发明采用分子自组装方法，可以方便的大规模制备转染复合物，而且该复合物在生物体内可降解，具有较高的使用安全性。