本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种比伐芦定的制备方法。发明采用Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH与Fmoc‑Gly‑Gly‑OH不存在侧链保护的氨基酸片段为原料，工艺简单，质量可控，易工业化生产，且通过Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH更好的避免了Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑OH溶解性差、重结晶困难等难点，同时避免了Bivalirudin±1Gly和Bivalirudin±2Gly的杂质产生。固相合成比伐芦定操作简单，易工业生产，采用TFA裂解，避免HF使用，安全性高，合成比伐芦定粗品纯度在93％以上，产率99％以上。采用乙酸铵溶液和乙腈进行一步纯化，TFA/水和乙腈完成二步纯化，冻干即可得到精肽纯度99.8％以上，收率58％以上，纯化工艺简单，更易于工业化大规模生产。