本发明提供了一种从枇杷叶中提取科罗索酸的分离纯化制备方法，属于医药生物技术领域。本发明的制备方法包括以下步骤：(1)制备枇杷叶粉；(2)将枇杷叶粉经超声波提取10～15min，超声波提取完成后经减压浓缩去除乙醇，得到浸膏；(3)将浸膏溶解后置于超临界CO2流体中进行萃取；(4)将萃取后的分离液经大孔吸附树脂吸附，待吸附饱和后，采用乙醇进行解析，经减压回收乙醇，得到科罗索酸浓缩液；(5)将科罗索酸浓缩液调pH值至6‑7，静置后结晶即得到科罗索酸成品。本发明提供的制备方法能够实现快速高效提取科罗索酸，其简化制备工艺简单，提取纯化时间大大缩短，降低了生产成本，制备所得科罗索酸的纯度高、色度低。