本发明提供了一种丙酮丁醇梭菌胞外多糖的提取分离方法，包括如下步骤：(1)将丙酮丁醇梭菌种子液接种到发酵罐中，加入固定化材料，培养至固定化材料表面被丙酮丁醇梭菌生物膜完全覆盖；(2)用碱性溶液溶解丙酮丁醇梭菌的生物膜，离心去除菌体沉淀，向上清液中加入有机溶剂，使有机溶剂的体积分数为30％～90％，所述的有机溶剂为乙醇、丙酮或丁醇，离心，收集沉淀；再加酸调节pH为3.5～10.0，收集沉淀，两次收集的沉淀即为胞外多糖。本发明提供的胞外多糖分离提取方法，具有成本低廉，操作简单的特点。