本发明公开了一种原位活性氧和髓过氧化物酶响应性自发光聚合物材料、制备方法及其应用，属于生物医药领域。该原位活性氧和髓过氧化物酶响应性自发光聚合物材料的化学结构如下所示。原位活性氧和髓过氧化物酶响应性自发光聚合物材料以光敏剂二氢卟吩e6为基本骨架，化学键合化学发光小分子鲁米诺或其衍生物和聚乙二醇。在水溶液中自组装形成纳米粒，特异性对高活性氧和髓过氧化物酶水平微环境产生响应，基于化学发光共振能量转移效应，发射近红外光进行自发光成像；并伴随单线态氧的产生以发挥原位光动力治疗功能。本发明的聚合物材料制备工艺简单，反应条件易于控制，有广阔的应用前景。