本发明属于生物医药领域，具体涉及一种双靶标肿瘤疫苗及其制备方法和应用。本发明的肿瘤疫苗由肿瘤血管内皮标志物GPR124重组真核表达质粒和融合肽通过静电作用结合，GPR124重组真核表达质粒又由GPR124基因和真核表达载体连接组成。本发明的的双靶标肿瘤疫苗有如下优点：1)肿瘤疫苗具有双靶标，可同时抑制肿瘤血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡；2)本疫苗安全、易于制备纯化，免疫原性强，易被APC摄取；3)大大提高肿瘤治疗的有效性和安全性，在肿瘤治疗领域具有良好的应用前景。