鼠李糖酯是一种无毒，无污染，能生物降解，具有良好的选择性和专一性阴离子表面活性剂，具有优秀的表面活性，在医药、食品、化妆品、环境保护等众多工业领域有独特的应用前景。本发明筛选到一株具有高鼠李糖脂产量和高转化率的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)TIB‑R02 CGMCC No9376。根据其发酵特点设计改造相关发酵设备，实现300L发酵罐的串联发酵实验。根据生产菌的生产状态及设备的特点开发了铜绿假单胞菌TIB‑R02 CGMCC No9376发酵生产鼠李糖脂的生产工艺，在鼠李糖脂较高产量同时可以控制由于产生大量鼠李糖脂带来的表面活性产生的逃液问题。用该设备及发酵工艺在以75g/L棕榈油浓度为碳源时，鼠李糖脂产量达到60.6g/l，转化率达到80%以上。因此该菌株及生产工艺具有良好的工业应用前景。