本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种LC‑MS/MS测定血浆中去氧肾上腺素浓度的方法，包括一次提取：向所述样品中加入内标工作液和提取液，混合均匀后离心分层，收集上层液得第一上清液；衍生反应：将所述第一上清液浓缩干燥后，加入NaHCO3缓冲盐溶解，然后加入丹酰氯的乙腈溶液进行衍生反应；二次提取：向所述衍生反应后的反应液中加入提取液进行二次提取，离心得第二上清液，将第二上清液浓缩干燥后复溶，得到样品溶液；本发明的样品的前处理方法能够最大程度上提高前处理方法对低含量的去氧肾上腺素的提取率，有效去除血浆基质的干扰，提高特异性，最低检测限降低至0.02ng/ml，灵敏度提高至0.1nM，以适应于药物临床研究中对低浓度去氧肾上腺素浓度的检测要求。