本发明公开了一种红系特异高表达GFP的小鼠多能干细胞系及其构建方法。所述小鼠多能干细胞系通过显微注射的方式，将红系高表达GFP载体注入昆明白小鼠受精卵的雄原核中，培育转基因鼠，经验证插入性基因在特定组织细胞表达后，对转基因小鼠进行繁殖，待其子代小鼠的外源性基因的拷贝数稳定后，用其囊胚制备而成。本发明的小鼠多能干细胞系对于研究血细胞在体内外的形成衍变具有重要细胞学价值，这有助于揭开造血干的形成，造血微环境的复杂影响作用，同时有且于推动多能性干细胞体外向可移植造血干分化的研究进程。