本发明公开了一种胰岛素衍生物的制备方法，属于生物医药技术领域。采用本发明的融合体，有效促进胰岛素原蛋白在机体内的活性最大化，本发明还提供一套优化的蛋白体外变性复性反应体系，以使无活性的转铁蛋白‑胰岛素融合蛋白转变为有活性的转铁蛋白‑胰岛素融合蛋白，为转铁蛋白‑胰岛素融合的高效、低成本工业化生产提供一种新的、更为简化的工艺流程。